зеленый флуоресцентный белок (gfp) является своего рода биолюминесцентным белком, который содержится в кишечнополостных организмах. gfp легко обнаруживается, высокая чувствительность, устойчивые флуоресцентные свойства, сильная переносимость, легко выражается, без цитотоксичности, используется для обнаружения живых клеток. поэтому gfp можно использовать в качестве репортерного гена для обнаружения экспрессии или регуляции гена или в качестве метки слияния для обнаружения локализации, миграции, изменения конформации и межмолекулярного взаимодействия белковой молекулы или целевого маркера некоторых органелл. максимальный пик спектра поглощения gfp составляет 395 нм (uv) и с 470 нм заместителем пика поглощения (синий луч). максимальный пик спектра излучения составляет 509 нм (зеленый луч) и с боковым пиком 540 нм (shouder). 450 нм-490 нм является только заместителем пика поглощения gfp, но поскольку свет возбуждения меньше повреждает клетки, полоса обычно используется чаще (в основном 488 нм). кроме того, спектральные свойства gfp аналогичны изотиоцианат флуоресцеина (fitc), оба из них обычно имеют набор фильтров. Флуоресценция gfp чрезвычайно стабильна. под светом возбуждения способность gfp фото-отбеливания сильнее флуоресцеина. в частности, он более устойчив на синей лучевой волне 450 нм-490 нм. аналогично, чувствительность флуоресценции слитого белка gfp выше, чем флуоресцентное антитело флюорохромной маркировки, является сильной противовоспалительной способностью к отбеливанию, которая более подходит для количественного определения и анализа. генерация флуоресценции gfp не нуждается ни в каком экзогенном субстрате реакции. поэтому gfp как широко применяемый живой репортерный белок, его эффект не имеет себе равных с любым другим репортерным белком фермента. однако gfp не является ферментом. сигнал флуоресценции не имеет эффекта ферментативного усиления. поэтому чувствительность gfp может быть ниже, чем у других фермент-репортерных белков, таких как люцифераза светлячков.

способы наблюдения gfp:

1.портативный источник возбуждения gfp

использование портативного источника возбуждения gfp является наиболее удобным и быстрым методом наблюдения (называемым зеркалом наблюдения флуоресцентного белка). потому что gfp имеет более высокий пик поглощения на 470 нм, используя источник света возбуждения 470 нм, может стимулировать gfp излучать ярко-зеленую флуоресценцию. мы должны носить профессиональное смотровое стекло, чтобы наблюдать четкий сигнал флуоресценции, когда мы наблюдаем флуоресценция gfp , причина возбуждения - интенсивный синий свет.

2.uv источник света

используя источник света uv (называемый лампа накаливания , лампа черного света) наблюдение также очень удобно. но если вы наблюдаете растение, то лиственный зеленый цвет растения также флуоресцирует под ультрафиолетовым светом. он будет вмешиваться флуоресценция gfp , кроме того, образцы могут также вызывать повреждение образцов gfp под ультрафиолетовым светом.

3. Флуоресцентный микроскоп

флуоресцентный микроскоп основан на uv в качестве источника света, используется для облучения обнаруженного объекта, делает его флуоресцирующим, а затем наблюдает за формой и расположением объекта под микроскопом. флуоресцентный микроскоп используется для исследования абсорбции внутриклеточных веществ, транспортировки, распределения и размещения химических веществ. некоторые вещества в клетке, как листовые зеленые, могут флуоресцировать после облучения ультрафиолетовым светом. другие вещества, не флуоресцируют сами по себе, но если вы окрашиваете его флуоресцентным красителем или флуоресцентным антителом, он также может флуоресцировать ультрафиолетовым светом. флуоресцентный микроскоп является одним из инструментов качественного и количественного исследования таких веществ. в настоящее время популярным методом является использование флуоресцентного микроскопа. флуоресцентный микроскоп очень популярен в лаборатории. но единственный недостаток заключается в том, что кусочки листа или животного должны собираться для наблюдения, что разрушит культивированные образцы и не сможет наблюдать viviperception.

всесторонний анализ, это самый быстрый и удобный способ наблюдения gfp путем использования портативного источника возбуждающего света gfp (называемого трансгенным биосом).